Prác. 4 Cromatografia en Capa Fina

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Universidad Tecnológica de México Ingeniería Química Materia: Química Analítica III

Práctica 4 Área: Ingeniería

Química Analítica III

UNITEC Campus Sur

Septiembre 2011

Práctica No. 4 Cromatografía en capa fina

Fecha de Elaboración: ____________ Fecha Revisión: _________________ Responsable: ___________________

Objetivo

Demostrar que se puede separar los componentes de una mezcla por cromatografía de capa fina basándose en sus pesos moleculares

Normas de Seguridad.  No tener contacto directo (con piel, ojos o vías respiratorias) con ninguno de los reactivos empleados en esta práctica.  Cuando se pesen o midan los reactivos, tener cuidado de no derramarlos, en caso contrario limpiarlos inmediatamente.  Extraer los reactivos de los frascos con espátulas y pipetas perfectamente limpias y no devolver a los contenedores los reactivos no utilizados.  Al provocar reacciones de combustión, asegurarse de que el material no apunte hacia ningún compañero  Al utilizar pipetas, hacer uso de propipetas, jamás succionar con la boca.  Cuando la sesión experimental haya finalizado, el alumno deberá limpiar su lugar de trabajo y cerciorarse de que las llaves del gas y del agua queden cerradas

Equipo de Seguridad.  Bata.  Lentes de protección.  Zapatos cerrados.

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Investigación Previa 1. Concepto de Cromatografía. 2. Clasificación de la Cromatografía. Definición y ejemplos. 3. Características y aplicaciones de cromatografía de capa fina. 4. Eluyentes, soportes y reveladores más comunes para cromatografía en capa fina. 5. Factores que influyen en una separación por cromatografía en capa fina.

NOTA: Los alumnos deberán traer por equipo, tinta china o repuesto de pluma fuente, así como muestras de vitamina “A” y “D”. Equipo: 1 3 3 1 2

Cuba Cromatografía Placas cromatografías Tubos capilares Lámpara UV. Vasos de precipitados de 10 ml

Materiales 100 ml Alcohol etílico 100 ml Éter etílico Grasa Silicona

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Marco Teórico El botánico ruso Mikhail Tswett estableció las ventajas de la cromatografía y fue el primero en utilizar este término, Es recordado como el Padre de la Cromatografía, Ismailov y Scraiber utilizaron láminas de vidrio para colocar capas muy delgadas de alúmina y luego aplicaron extractos vegetales, dando así la primera forma de Cromatografía de Capa Fina. Egon Stanl (1956) dio el nombre de Cromatografía de Capa Fina. Estandarizo los procedimientos, equipos y adsorbentes dando auge a la técnica simple, a bajo costo y eficiente.

Proceso de Adsorcion. La muestra aplicada en la capa es adsorbida en la superficie del material por la acción de fuerzas electrostáticas (fuerzas de Van der Waals, puentes de hidrógeno, efectos inductivos, etc). Luego, cuando la capa es expuesta a un flujo por acción capilar, se inicia una competencia de enlaces entre los sitios activos del adsorbente y la sustancia con el solvente.

Adsorbentes Los adsorbentes más utilizados en la cromatografía de capa fina son: Silica gel (se utiliza en el 80% de las separaciones) Oxido de aluminio o alúmina (ácida, neutra o básica) Tierra Silicea o Kieselguhr Celulosa (nativa o micro-cristalina) Poliamidas Estos adsorbentes deben tener las siguientes características. Tamaño de partícula: Volumen de poro, Diámetro de poro y área superficial. Homogeneidad Pureza

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Preparación de la Práctica Preparación de la placa cromatográfíca Se usan como soporte del adsorbente laminas de vidrio, plástico o metálicas (aluminio). Los tamaños de la placa para TLC convencional son. 20 X 20, 10 X 20 y 5 x 2. Hay placas que contienen un indicador de Fluorescencia: F254 ó F366. El numero que aparece como subíndice nos indica la longitud de onda de excitación del indicador utilizado. Aplicación de la muestra La muestra se aplica en la placa según el objetivo, analítico o preparativo en banda o el punto o mancha. Desarrollo de la placa Es un proceso mediante el cual son transportados los componentes a separar, a través de la fase estacionaria por la fase móvil. Elección del solvente. Camaras para desarrollo. Existen varios tipo de cámaras: Normal Sándwich

Doble compartimiento Horizontal

Detección o visualización Si la muestra (mancha) no es coloreada se requiere de métodos que nos permitan visualizar el (los) componente(s) presentes. También se conoce este procedimiento como revelado. Estos métodos pueden ser: Químicos: por inmersión rociado. Se obtienen derivados coloreados o fluorescentes. Físicos: ópticos. Generalmente se utiliza radiación UV. Evaluación de un cromatograma de capa fina. Análisis cualitativo. Medida de Rf. Comparación visual de color / intensidad. Propiedades UV / IR / MS / NMR

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Análisis cuantitativo Semi – cuantitativo: Comparación visual del diámetro y la intensidad del color de la mancha contra una serie de manchas patrones de concentración conocida. Cuantitativo: o Indirecta o Directa Medida de transmisión Densimetría: Medida de emisión Fluorescencia Espectrofotometría Fluorescencia con “quenching”

Desarrollo Ver diagramas de flujo. Para tinta china y vitaminas.

Análisis y Presentación de Resultados 1. En los experimentos, ¿Cuáles formas de emulsión mayor permitió mayor separación de la mezcla?, ¡ A que se debe esta separación? Explica. 2. ¿Por qué la cromatografía de capa fina es un criterio parcial y no total de identificación?

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Notas para los Alumnos 1. El reporte final de la práctica deberá ser entregado a máquina o en procesador de textos (PC) sin excepción. 2. Las prácticas impresas solo sirven de guía y referencia. 3. No se aceptan copias fotostáticas del reporte final. 4. La entrega del reporte final de la práctica es por alumno.

Conclusiones del Aprendizaje

Recursos Bibliográficos Moore J. A. and Dalrymple D.L. Experimental Methods in Organic Chemistry Second Edition, W. B. Saunders Co., Philadelphia, 1976. Brewster R. Q., Vander Werf C. A., Mc Ewen W.E. Curso Práctico de Química Orgánica 2ª. Edición. Editorial Alambra, S. A. Madrid, 1979. Robert R. M., Gilbert J. C. and Rodewald L.B. Modern Experimental Organic Chemistry. Third Edition. Holt. Rinehart and Winston, N. Y. 1979. Willard

Hobart. “Métodos de análisis instrumental”. Editorial CECSA

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