SLIDE AULA 4 -Citogenética e cromossomopatias

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Citogenética clínica e cromossomopatias Profa Fernanda Freire Campos Nunes

Classificação cromossômica quanto à posição do centrômero

Não existem cromossomos humanos do tipo telocêntricos

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CONSTITUIÇÃO CROMOSSÔMICA HUMANA NORMAL

46 cromossomos 22 pares de autossomos / 1 par de cromossomos sexuais

CROMOSSOSMOS Cromossomos são visualizados ordenados de acordo com o TAMANHO dos braços e POSIÇÃO relativa do CENTRÔMERO

Análise requer células em divisão (sangue periférico, medula óssea, tumor sólido, fluido amniótico)

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Valor ob(do na medida

Aumento de risco

2,5mm a 3,9mm

3 vezes maior

4,0mm a 4,9mm

18 vezes maior

5,0mm a 5,9mm

28 vezes maior

6,0mm ou mais

36 vezes maior

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CROMOSSOSMOS: MORFOLOGIA / ESTRUTURA ⇒ DIAGNÓSTICO

Bandeamento de Cromossomos 1. Coloração G (Giemsa) - método mais frequente

BANDEAMENTO DE CROMOSSOMOS    Bandas G-pálidas  DNA rico em GC 

 Bandas G-escuras  DNA rico em AT 

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Coloração cromossômica Hibridização in situ por fluorescência (citogenética molecular) FISH Avaliar a presença ou ausência de uma sequência particular de DNA ou o número e organização cromossômica Sondas específicas de DNA para regiões cromossômicas ou genes podem ser usadas e podem identificar até mesmo pequenas alterações Sondas de cromossomos inteiros (pintam o cromossomo) Hibridização genômica comparativa CGH

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CITOGENÉTICA MOLECULAR  

FISH (hibridização in-situ fluorescente) • 

Técnica utiliza segmento de DNA

marcado (sonda) específico para um cromossomo que se hibridiza com cromosomo em metáfase, prófase ou intérfase

• 

Visualização em microscópio de

fluorescência. • Varios tipos de sondas: centroméricas, teloméricas, gene-específicas etc

Sondas centroméricas: aneuploidias

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Localização de sequências de DNA nos cromossomos humanos usando FISH

Panels a and b modified from McNeil, N., et al., Novel molecular cytogenetic techniques for identifying complex chromosomal rearrangements: Technology and applications in molecular medicine, Experimental Review in Molecular Medicine (2002). Panel c reproduced from PadillaNash, H. M., et al., Molecular cytogenetic analysis of the bladder carcinoma cell line BK-10 by spectral karyotyping, Genes Chromosomes Cancer 25, 53–59 (1999).

Sondas locus específicas

Detecção do ponto de quebra de uma translocação cromossômica detectada por FISH entre os cromossomos 11 e 19 de um paciente com várias mal formações e retardo mental

Copyright 2001 Nature Publishing Group, Cheung, V. G., et al., Integration of cytogenetic landmarks into the draft sequence of the human genome, Nature 409, 953–958

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Sondas teloméricas: deleções terminais e perdas teloméricas

CITOGENÉTICA MOLECULAR  

FISH

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DIAGNÓSTICO GENÉTICO PRÉ-IMPLANTAÇÃO

3 sinais vermelho: blastômero com trissomia do 21

Hibridização Genômica Comparativa (CGH) Apresenta melhor resolução que cariotipagem (até 100 x maior), permitindo detecção de anomalias cromossômicas não detectadas por outro método O CGH é principalmente indicado para doentes com cariótipos normais e: 1. Atraso mental/desenvolvimento sem justificação clínica; 2. Anomalia congênita; 3. Doenças do espectro características clínicas cromossomal.

do autismo, indicativas de

convulsões ou uma anomalia

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Hibridização Genômica Comparativa (CGH) A técnica é baseada na hibridização competitiva in situ por sondas fluorescentes entre amostras de DNA caso (fluorescência verde) e DNA controle/normal (fluorescência vermelha), evidenciadas em metáfases normais de linfócitos T de sangue periférico. Amplificação/ganho: excesso do DNA teste (verde) Deleção/perda: excesso do DNA normal (vermelho)

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Diagnóstico Pré-Natal -O diagnóstico pré-natal permite a detecção de doenças genéticas ainda durante a gravidez (análise cromossômica do feto) -Indicações: problemas de crescimento e desenvolvimento iniciais; natimorto e morte neonatal; problemas de fertilidade; histórico familiar; gestação de mulheres com idade avançada (acima de 35 anos);

Diagnóstico Pré-Natal -Material analisado: *Vilosidades coriônicas (11 semanas de gravidez) *Amniocentese (exame de líquido amniótico) em torno de 15 semanas Ambos apresentam riscos de aborto

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Métodos não invasivos

A partir da 8ª semana gestação

Alterações cromossômicas •  Pelo menos 80% dos abortos espontâneos durante o primeiro trimestre apresentam uma anomalia cromossômica. •  20% dos abortos espontâneos no segundo trimestre •  Principais causas de retardo mental e mortalidade gestacional

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Alterações cromossômicas- causas •  Idade materna e paterna • Predisposição genética para a não disjunção • Radiações, drogas e virus  

- Maioria dos casos observados em abortos espontâneos. - Raros casos eram natimortos. -  Pode ser causada por: 1- erro na fase de maturação da ovogênese ou espermatogênese- formação de espermatozóide diplóide. 2Dispermia.

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ANOMALIAS CROMOSSÔMICAS NUMÉRICAS 2- ANEUPLOIDIAS AUTOSSÔMICAS •  Há um aumento ou diminuição de um ou mais

pares de cromossomos, mas não de todos (Cromossomos ausentes ou adicionais) •  Não contém múltiplo de 23 cromossomos •  Com maior freqüência apenas um cromossomo está afetado

CAUSAS: •  NÃO DISJUNÇÃO CROMOSSÔMICA DURANTE MEIOSE (Meiose I e ou II). •  NÃO DISJUNÇÃO NA MITOSE

MECANISMOS DE NÃO DISJUNÇÃO NA MEIOSE I (A) E MEIOSE II (B)- ERRO PRÉ-ZIGÓTICO

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MECANISMOS DE NÃO DISJUNÇÃO NA MITOSE-

ERRO PÓS-

ZIGÓTICO

Mosaicismo: 46XX/47XX+21 •  Pode ocorrer nas primeiras divisões mitóticas após a formação do zigoto. •  Presença de 2 linhagens celulares diferentes no mesmo indivíduo.

¢ SÍNDROMES

CROMOSSÔMICAS RELACIONADAS À ESTRUTURA DOS CROMOSSOMOS

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Monossomia do 5p ou Síndrome de Cri du Chat 46, XX ou XY, 5p- (deleção no braço curto do cromossomo 5)

Carió&po de indivíduo do sexo feminino com Síndrome de Cri du chat.

Monossomia do 5p ou Síndrome de Cri du Chat 46, XX ou XY, 5p- (deleção no braço curto do cromossomo 5) •  Peso Baixo ao nascer, crescimento lento •  Deficiência mental •  Hipotonia (redução da força muscular) •  Microcefalia •  Face Arredondada •  Choro como o miado do gato * freqüência 1:50.000 nascimentos (85% resultam de uma nova deleção)

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Monossomia do 4p ou Síndrome de WolfHirschhorn (46, XX ou XY, -4p) •  Deleção

parcial do braço curto do cromossomo 4.

•  A maioria é constituída por casos esporádicos, ou seja, são raros os casos familiais de monossomia do 4p.

Sinais clínicos: •  Microcefalia •  Hipotonia •  Defeitos congênitos no coração •  Retardamento Físico e Mental severo

Deleção no cromossomo 4q • C rescimento Pós-Natal deficiente • Retardamento Mental de moderado a severo; • Hipotonia; Fenda Palatina • D efeitos congênitos no coração • 50% morrem nos primeiros 15 meses devido a complicações respiratórias

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Duplicação no cromossomo 5q

•  46, XX ou XY, 5q (duplicação de cerca de 10% do braço longo do cromossomo 5). • Características: Retardamento Físico e Mental, Boca pequena, Testa protusa

¢ SÍNDROMES

CROMOSSÔMICAS RELACIONADAS ÀS TRISSOMIAS DE AUTOSSOMOS

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TRISSOMIAS •  TRÊS CÓPIAS DE UM CROMOSSOMO TRISSOMIA DO CROMOSSOMO 21 47,XY, +21 OU 47,XX, + 21: erro meiótico Mosaicismo: 46XX/47XX +21 Translocação

Cariótipo de indivíduo do sexo feminino com Síndrome de Down

TRISSOMIA DO CROMOSSOMO 21

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CARACTERÍSTICAS:

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Down

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LINHA SIMIESCA: dobra de flexão profunda nas palmas das mãos

TRISSOMIA DO 13- SÍNDROME DE PATAU 47 XX ou XY +13: erro meiótico 46XX ou XY/47XX ou XY +13: mitótico Mosaicismo Translocação

Clinicamente grave e letal. O cromossomo extra provém de não-

disjunção na meiose I materna.

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TRISSOMIA DO 13 (47,XY, +13) SÍNDROME DE PATAU Ø  APARÊNCIA E CARACTERÍSTICAS -Tríade: microftalmia, lábio leporino e/ou palato fendido e polidactilia. - Crises de apnéia - Convulsões - Dificuldades de alimentação - Grave retardo do crescimento pós-natal - Microcefalia - Anomalias oculares (microftalmia, anoftalmia, displasia da retina).

- Criptorquidia e escroto anormal no meninos - Cliteromegalia e útero bicórneo nas meninas - Artéria umbilical única - Hérnia inguinal ou umbilical - Rim policístico - Hidronefrose e hidroureter - Possuem mãos com flexões acentuadas e sobreposição de digitais

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Síndrome de Patau

Síndrome de Patau

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TRISSOMIA DO CROMOSSOMO 18- Síndrome de Edwards 47XY ou XY +18: erro meiótico 46XX ou XY/47XX ou XY +18: mitótico- mosaicismo Raras translocações

Cariótipo de indivíduo do sexo masculino com Síndrome de Edwards

TRISSOMIA DO CROMOSSOMO 18 (47,XY, +18) = Síndrome de Edwards •  Segunda trissomia quanto a freqüência - concepção natimortos com malformações •  Prevalência: 1/7500 nativivos •  50% morrem no primeiro mês de vida • 10% sobrevivem até um ano •  Sobrevida durante lactação - acentuada incapacidade de desenvolvimento

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TRISSOMIA DO CROMOSSOMO 18 (47,XY, +18) = Síndrome de Edwards Sinais clínicos/fenótipo: •  Baixo peso gestacional •  Hipertonia muscular •  Espinha bífida •  Atraso psicomotor grave/ retardo mental acentuado •  Orelhas displásicas com implantação baixa •  Micrognatia/ boca pequena de difícil abertura •  Onfalocele •  Hérnia diafragmática •  Parecidos com Patau

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Outras trissomias raras Ø  Trissomia do 8: •  Deficiência mental variável •  Fronte alta e saliente, face alongada, ptose palpebral, leve hipertelorismo, nariz largo, labio inferior grosso, palato ogival, micro e retrognatia, orelhas dismórficas de baixa implantação, pescoço curto. •  Anomalias vertebrais, ombros estreitos, tronco alongado e magro, cardiopatia congênita em 50% dos casos, pés tortos, aracnodactilia, linha simiesca.

Outras trissomias raras Ø  Trissomia do 8:

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Outras trissomias raras Ø  Trissomia do 9: •  Grave deficiência mental, microcefalia, estrabismo, prega epicântica, ar preocupado, boca assimétrica, orelhas dismórficas protrusão da língua e Rio et al. (2002) descreveram naPor meio do exame físico intrabucal diagnosticadee filtro baixa implantação, micrognatia, labio superior o central inferior, riz labial curto e também protrusão da língua. ram-se lesões de cáriecobre no incisivo superior esNo aspecto odontológico, a literatura é escassa. querdo e manchas brancas ativas nas faces vestibulapescoço curto. Assim, o objetivo deste trabalho é relatar as caracte- res dos dentes anteriores inferiores. 11

rísticas bucais e o tratamento efetuado numa criança com trissomia do cromossomo 9, uma vez que, em virtude da raridade dessa trissomia, novos relatos de caso possam contribuir para somar conhecimentos.

Realizaram-se radiografia panorâmica e telerra-

diografia lateral; na incidência panorâmica verificou•  Tórax afunilado, hipertelorismo mamilar, escoliose, cardiopatia se ausência de anomalias dentais de forma, tamanho em 50% dos casos, diástese do reto, deficiência de crescimento, e número (Fig. 3). Na telerradiografia observaram-se a presença de severa micrognatia e predomínio do hipogonadismo. crescimento da face no sentido vertical (Fig. 4). Relato do caso O presente trabalho foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa da Faculdade de Odontologia de Riberão Preto. Paciente feminino, leucoderma, com dez anos de idade, compareceu ao Centro de Formação de Recursos Humanos Especializado no Atendimento Odontológico a Pacientes Especiais da Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo, em busca de tratamento. Outros profissionais já haviam tentado o procedimento, porém não havia sido efetuado em virtude da falta de colaboração da criança. Durante a anamnese, a mãe relatou que a paciente apresentava trissomia parcial do cromossomo 9, diagnosticada em 2000 por meio de cariótipo realizado pelo Departamento de Genética da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo. Ao exame físico extrabucal, observaram-se assimetria facial, cabelos finos, hipertelorismo, estrabismo, pavilhões auriculares com implantação baixa, micrognatia acentuada, ângulos labiais inclinados para baixo (Fig. 1A e 1B) e assimetria das mãos (Fig. 2). Foram constatados também retardo mental e dificuldade de andar e falar.

•  Palmas das mãos muito longas, deslocamento dos joelhos, tornozelos, quadris e cotovelos, linha simiesca.

Figura 3 - Radiografia panorâmica revelando a ausência de anomalias dentais

Outras trissomias raras

Figura 4 - Telerradiografia: presença de severa micrognatia e predomínio do crescimento da face no sentido vertical

Figura 1- Fotografias da paciente: A - foto frontal e B - foto de perfil, exibindo assimetria facial, hipertelorismo, pavilhões auriculares com implantação baixa, micrognatia e ângulos labiais inclinados para baixo

Figura 2 - Fotografia mostrando assimetria das mãos

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O tratamento odontológico foi realizado em ambiente ambulatorial, com a utilização de técnicas rotineiras de manejo comportamental, tais como falar-mostrarfazer, reforço positivo e premiação, pois a criança se apresentava, inicialmente, resistente ao tratamento. Os procedimentos clínicos foram iniciados com a avaliação do risco/atividade de cárie, na qual se constatou que a paciente apresentava lesões ativas de cárie, demonstradas pela presença de manchas brancas na face vestibular dos incisivos inferiores. Assim, foram realizadas quatro sessões de profilaxia, aplicação de clorexidina e aplicação tópica de flúor fosfato acidulado a 1,23%. Foram fornecidas à mãe instruções sobre higiene bucal e hábitos alimentares; durante o atendimento odontológico da paciente, as instruções foram enfatizadas. Na seqüência do tratamento, foi aplicado selante na face oclusal do dente 84 e dos primeiros molares

RFO UPF 2006; 11(2):69-72

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Outras trissomias raras Ø  Trissomia parcial do 22 (síndrome do olho do gato): •  Deficiência mental variável, microcefalia, pregas epicânticas, fissura palatina, micrognatia, cardiopatia em 50% dos casos, deslocamento dos quadris, mãos com polegares anormais,sulco pré-auricular, coloboma de íris, surdez.

Aneuploidias dos cromossomos sexuais UNI Medicina – genética e biologia molecular Profa Fernanda Freire Campos Nunes

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 MONOSSOMIA DO CROMOSSOMO X (SÍNDROME DE TURNER) Etiologia: •  50% dos casos tem genótipo 45,X não disjunção (o mais comum é a perda do X materno) •  30-40% dos casos são mosaico (45X/46XX; 45X/47XXX; 45X/46XX/47XXX). •  Podem ocorrer indivíduos 45X/46XY ⇒ propensos a malignidades em suas fitas gonadais (gonadoblastomas). •  10-20% dos casos apresentam anomalia estrutural no cromossomo X •  5% são constituídos por pacientes com alterações estruturais no cromossomo Y.

Incidencia: 1/5.000 nascimentos femininos vivos (a maioria dos conceptos se perdem pré natalmente) •  80% das monossomias do X resultam de erros meióticos no pai Prevalência:1/2500 a 1/5000 • C orrespondem de 15 a 20% das anomalias cromossômicas em abortos espontâneos. •  Síndrome de Turner é uma condição que afeta apenas meninas. •  Cerca de 30% das crianças são diagnosticadas ao nascimento e outras 25,5% durante a período médio da infância.

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Síndrome de Turner

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